反相高效液相色谱(能溶解在水中的物质我们一般用什么方法分离)
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2023-11-05
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1. 反相高效液相色谱,能溶解在水中的物质我们一般用什么方法分离?
分离能溶解在水中的物质有很多方法,常用的有:蒸发法、结晶法、过滤法、膜分离法、离心法、萃取法、电解法、吸附法和沉淀法等。这些方法的选择取决于物质的性质和分离的目的。
例如,如果需要分离的化合物是极性分子,可以使用离子交换树脂或反相高效液相色谱(RP-HPLC)等方法。
2. 液相色谱?
反相液相色谱法中,物质极性强的先出峰,极性弱的后出峰,在正相色谱中相反,物质极性强的后出峰,极性弱的先出峰。
当然这个不是完全固定的。具体的看你的实验方法,看固定相和流动相。 一般反相色谱是极性大的先出峰,极性小的后出峰。不过如果流动相中有酸碱性就不一定了。比如流动相是弱酸性的,那么样品中的碱性物质会提前出峰。
3. 为什么高效液相的柱子都是反向柱?
不是都是反相柱,是反相应用范围广所致。
4. 高相液相色谱法可分为几类?
高相液相色谱法主要可以分为以下几类:1. 正相色谱法:使用非极性固定相,如硅胶、氧化铝等,适用于分离非极性化合物。2. 反相色谱法:使用极性固定相,如硅胶、聚酰胺等,适用于分离极性化合物。3. 离子交换色谱法:使用离子交换剂作为固定相,根据样品中离子的电荷性质进行分离。4. 排阻色谱法:使用具有特定孔径的固定相,如凝胶、硅胶等,适用于分离大分子量化合物。5. 亲和色谱法:使用具有特定亲和力的固定相,如抗体、抗原等,适用于分离具有特定相互作用力的化合物。以上是高相液相色谱法的主要分类,不同类型的色谱法可以根据不同的样品性质和应用场景进行选择。
5. 正相与反相如何选择?
反相还是正相,是根据流动相相对于固定相的极性而言的。 流动相极性强于固定相的,称作反相色谱;流动相极性弱于固定相的,称作正相色谱。 反相色谱流动相的极性强,容易带着极性分子走,而留下非极性分子。这主要用于非极性样品的分离。常用的高压液相色谱都是这种,也有人喜欢说反相液相色谱,其实是一个意思,就是显得博学一点。 正相色谱固定相极性强,容易把极性分子留下,故主要用于极性样品的分离。如离子色谱。 实际应用好像没有太注意正相还是反相,倒是都很注意柱子能承受什么样极性的物质。反相液相色谱柱不可以用强极性的纯水,都是要加入至少5%的有机溶剂来弱化水的极性。 正相的离子色谱柱则坚决不可以进入有机物质。但是气相色谱实际也是一种正相色谱,却往往要求不可以有水进入。
6. 高效液相色谱使用步骤?
1). 过滤流动相,根据需要选择不同的滤膜。
2). 对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。
3). 打开HPLC工作站(包括计算机软件和色谱仪),连接好流动相管道,连接检测系统。
4). 进入HPLC控制界面主菜单,点击manual,进入手动菜单。
5). 有一段时间没用,或者换了新的流动相,需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵,直接在泵的出水口,用针头抽取。冲洗进样阀,需要在manual菜单下,先点击purge,再点击start,冲洗时速度不要超过10 ml/min。
6). 调节流量,初次使用新的流动相,可以先试一下压力,流速越大,压力越大,一般不要超过2000。点击injure,选用合适的流速,点击on,走基线,观察基线的情况。
7). 设计走样方法。点击file,选取select users and methods,可以选取现有的各种走样方法。若需建立一个新的方法,点击new method。选取需要的配件,包括进样阀,泵,检测器等,根据需要而不同。选完后,点击protocol。一个完整的走样方法需要包括:a.进样前的稳流,一般2-5分钟;b.基线归零;c.进样阀的loading-inject转换;d.走样时间,随不同的样品而不同。
8). 进样和进样后操作。选定走样方法,点击start。进样,所有的样品均需过滤。方法走完后,点击postrun,可记录数据和做标记等。全部样品走完后,再用上面的方法走一段基线,洗掉剩余物。
9). 关机时,先关计算机,再关液相色谱。
10). 填写登记本,由负责人签字。
7. 求问如何精确测定死时间和死体积?
一般情况下在流动相中不保留的成分,出来的第一个峰就是死时间。因此,死体积=死时间X流量。
死时间( t0)是液相色谱中的重要参数,其值的精确测定对分离条件的优化和色谱热力学研究具有重要意义。在反相色谱中.固定相极性较弱.流动相一般为强极性的水、甲醇、乙腈等.故通常采用极性更强的NaNO3或NH4No3作为标记物,进行死时间的测定。但由于标记物与固定相之间,存在着一定的相互作用.因此测定结果会与真实死时间有一定的偏离。
通常以NaNO3等强极性溶质进行反相液相色谱中死时间测定时,其与固定相之问极弱的相互作用可以忽略不计。这种方法得到的死时间可以进一步用于色谱保留机理的热力学研究和分离条件的优化。
高效液相色谱中死时间是个非常重要的基础参数。在进行色谱条件优化及定性鉴定时都需要用到。
液相色谱中的基本理论与气相色谱相同,但液相色谱系统与气相色谱系统却有很大差别 如液体的扩散系数和料颗粒的孔体积,也包括填料颗粒间的孔隙体积.故影响死时间的因素也比气相色谱复杂得多。
在色谱中测定死时间通常有两种方法,一是用所谓的无保留的探测物如脲嘧啶、D2O、某些无机盐等直接测定;二是根据同系物的保留时间用数学方法进行计算求取死时间。
测定死时间最简单的方法:
液固色谱死时间:可用苯、四氯乙烯或KNO3水溶液作探针测死时间。
液液色谱死时间:反相用NaCI、NaNO3、HNO3、HCIO3、苯甲酸、苦味酸、尿嘧啶水溶液测死时间,但测量误差较大。正相用四氯乙烯、四氟乙烯测死时间。附文1)反向液相色谱中测定死时间的新方法2)反相高效液相色谱中死时间的测定
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1. 反相高效液相色谱,能溶解在水中的物质我们一般用什么方法分离?
分离能溶解在水中的物质有很多方法,常用的有:蒸发法、结晶法、过滤法、膜分离法、离心法、萃取法、电解法、吸附法和沉淀法等。这些方法的选择取决于物质的性质和分离的目的。
例如,如果需要分离的化合物是极性分子,可以使用离子交换树脂或反相高效液相色谱(RP-HPLC)等方法。
2. 液相色谱?
反相液相色谱法中,物质极性强的先出峰,极性弱的后出峰,在正相色谱中相反,物质极性强的后出峰,极性弱的先出峰。
当然这个不是完全固定的。具体的看你的实验方法,看固定相和流动相。 一般反相色谱是极性大的先出峰,极性小的后出峰。不过如果流动相中有酸碱性就不一定了。比如流动相是弱酸性的,那么样品中的碱性物质会提前出峰。
3. 为什么高效液相的柱子都是反向柱?
不是都是反相柱,是反相应用范围广所致。
4. 高相液相色谱法可分为几类?
高相液相色谱法主要可以分为以下几类:1. 正相色谱法:使用非极性固定相,如硅胶、氧化铝等,适用于分离非极性化合物。2. 反相色谱法:使用极性固定相,如硅胶、聚酰胺等,适用于分离极性化合物。3. 离子交换色谱法:使用离子交换剂作为固定相,根据样品中离子的电荷性质进行分离。4. 排阻色谱法:使用具有特定孔径的固定相,如凝胶、硅胶等,适用于分离大分子量化合物。5. 亲和色谱法:使用具有特定亲和力的固定相,如抗体、抗原等,适用于分离具有特定相互作用力的化合物。以上是高相液相色谱法的主要分类,不同类型的色谱法可以根据不同的样品性质和应用场景进行选择。
5. 正相与反相如何选择?
反相还是正相,是根据流动相相对于固定相的极性而言的。 流动相极性强于固定相的,称作反相色谱;流动相极性弱于固定相的,称作正相色谱。 反相色谱流动相的极性强,容易带着极性分子走,而留下非极性分子。这主要用于非极性样品的分离。常用的高压液相色谱都是这种,也有人喜欢说反相液相色谱,其实是一个意思,就是显得博学一点。 正相色谱固定相极性强,容易把极性分子留下,故主要用于极性样品的分离。如离子色谱。 实际应用好像没有太注意正相还是反相,倒是都很注意柱子能承受什么样极性的物质。反相液相色谱柱不可以用强极性的纯水,都是要加入至少5%的有机溶剂来弱化水的极性。 正相的离子色谱柱则坚决不可以进入有机物质。但是气相色谱实际也是一种正相色谱,却往往要求不可以有水进入。
6. 高效液相色谱使用步骤?
1). 过滤流动相,根据需要选择不同的滤膜。
2). 对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。
3). 打开HPLC工作站(包括计算机软件和色谱仪),连接好流动相管道,连接检测系统。
4). 进入HPLC控制界面主菜单,点击manual,进入手动菜单。
5). 有一段时间没用,或者换了新的流动相,需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵,直接在泵的出水口,用针头抽取。冲洗进样阀,需要在manual菜单下,先点击purge,再点击start,冲洗时速度不要超过10 ml/min。
6). 调节流量,初次使用新的流动相,可以先试一下压力,流速越大,压力越大,一般不要超过2000。点击injure,选用合适的流速,点击on,走基线,观察基线的情况。
7). 设计走样方法。点击file,选取select users and methods,可以选取现有的各种走样方法。若需建立一个新的方法,点击new method。选取需要的配件,包括进样阀,泵,检测器等,根据需要而不同。选完后,点击protocol。一个完整的走样方法需要包括:a.进样前的稳流,一般2-5分钟;b.基线归零;c.进样阀的loading-inject转换;d.走样时间,随不同的样品而不同。
8). 进样和进样后操作。选定走样方法,点击start。进样,所有的样品均需过滤。方法走完后,点击postrun,可记录数据和做标记等。全部样品走完后,再用上面的方法走一段基线,洗掉剩余物。
9). 关机时,先关计算机,再关液相色谱。
10). 填写登记本,由负责人签字。
7. 求问如何精确测定死时间和死体积?
一般情况下在流动相中不保留的成分,出来的第一个峰就是死时间。因此,死体积=死时间X流量。
死时间( t0)是液相色谱中的重要参数,其值的精确测定对分离条件的优化和色谱热力学研究具有重要意义。在反相色谱中.固定相极性较弱.流动相一般为强极性的水、甲醇、乙腈等.故通常采用极性更强的NaNO3或NH4No3作为标记物,进行死时间的测定。但由于标记物与固定相之间,存在着一定的相互作用.因此测定结果会与真实死时间有一定的偏离。
通常以NaNO3等强极性溶质进行反相液相色谱中死时间测定时,其与固定相之问极弱的相互作用可以忽略不计。这种方法得到的死时间可以进一步用于色谱保留机理的热力学研究和分离条件的优化。
高效液相色谱中死时间是个非常重要的基础参数。在进行色谱条件优化及定性鉴定时都需要用到。
液相色谱中的基本理论与气相色谱相同,但液相色谱系统与气相色谱系统却有很大差别 如液体的扩散系数和料颗粒的孔体积,也包括填料颗粒间的孔隙体积.故影响死时间的因素也比气相色谱复杂得多。
在色谱中测定死时间通常有两种方法,一是用所谓的无保留的探测物如脲嘧啶、D2O、某些无机盐等直接测定;二是根据同系物的保留时间用数学方法进行计算求取死时间。
测定死时间最简单的方法:
液固色谱死时间:可用苯、四氯乙烯或KNO3水溶液作探针测死时间。
液液色谱死时间:反相用NaCI、NaNO3、HNO3、HCIO3、苯甲酸、苦味酸、尿嘧啶水溶液测死时间,但测量误差较大。正相用四氯乙烯、四氟乙烯测死时间。附文1)反向液相色谱中测定死时间的新方法2)反相高效液相色谱中死时间的测定
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